3/1:20422

2.4.22. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА МАСЕЛ МЕТОДОМ

ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Определение жирнокислотного состава масел проводят методом газовой хроматографии

(2.2.28) после перевода жирных кислот в метиловые эфиры.

МЕТОД А

Испытуемый раствор. Перед метилированием испытуемый образец (масло) подвергают

сушке при наличии указаний в частной монографии. 1.0 г испытуемого образца (масла)

помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 25 мл, снабженную обратным

холодильником и газоотводной трубкой. В колбу прибавляют 10 мл метанола безводного

Р и 0.2 мл раствора 60 г/л калия гидроксида P в метаноле P, присоединяют обратный

холодильник и пропускают азот P через смесь со скоростью около 50 мл/мин,

встряхивают и нагревают до кипения. Когда раствор станет прозрачным (обычно через 10

мин), продолжают нагревание в течение последующих 5 мин. Затем колбу охлаждают под

проточной водой и содержимое переносят в делительную воронку. Колбу промывают 5 мл

гептана Р, переносят промывной раствор в ту же делительную воронку и встряхивают.

указаниями в частной монографии. В случае, если раствор с определенным составом не

указан в частной монографии, используют состав, приведенный в таблице 2.4.22.-1).

Смесь растворяют в гептане P и доводят тем же растворителем до объема 50.0 мл.

Раствор сравнения (b). 1.0 мл раствора сравнения (а) доводят гептаном P до объема 10.0

мл.

Раствор сравнения (с). 0.50 г смеси метиловых эфиров жирных кислот, соответствующих

по составу смеси жирных кислот, указанной в частной монографии на испытуемое

образец (масло). Смесь растворяют в гептане P и доводят тем же растворителем до

диаметром от 0.2 мм до 0.8 мм, покрытая слоем макрогола 20 000 P толщиной от 0.1

мкм до 0.5 мкм или другой подходящей неподвижной фазой;

– газ-носитель: гелий для хроматографии P или водород для хроматографии Р;

– скорость газа-носителя: 1.3 мл/мин (для колонки с внутренним диаметром 0.32 мм);

– деление потока: 1:100 или менее в зависимости от внутреннего диаметр используемой

колонки (например, в случае использования колонки с внутренним диаметром 0.32 мм

деление потока должно составлять 1:50);

– детектор: пламенно-ионизационный;

– объем вводимой пробы: по 1 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (а), (b) и

должна составлять 200 °С);

– в случае линейного градиента температуры, температуру колонки увеличивают от 170

°C до 230 °C со скоростью 3 °С/мин;

– блока ввода проб: 250 °C;

– детектора: 250 °С.

Пригодность хроматографической системы:

раствора сравнения (b);

– число теоретических тарелок: не менее 30 000, рассчитанных по пику метилстеарата

на хроматограмме раствора сравнения (а).

При использовании калибровочных смесей, приведенных в таблице 2.4.22.-2 или 2.4.22.-3:

– разрешение: не менее 4.0 между пиками, соответствующими метилкаприлату и

метилдеканоату на хроматограмме раствора сравнения (а);

– отношение сигнал/шум: не менее 5 для пика, метилкаприата на хроматограмме раствора

Следует избегать условий хроматографирования, которые могут дать неразделенные пики

(наличие компонентов с небольшим различием между временами удерживания, например,

линоленовая и арахидоновая кислоты).

Качественное определение. Идентифицируют пики на хроматограмме раствора

сравнения (с) (изотермические условия хроматографирования или линейный градиент

температуры).

При использовании изотермических условий хроматогафирования пики могут быть также

идентифицированы построением калибровочных кривых с использованием

хроматограммы раствора сравнения (а) и данных приведенных в Табл. 2.4.22.-1, 2.4.22.-2 и

2.4.22.-3.

Таблица 2.4.22-2. – Смесь веществ(калибровочная смесь), применяемых для калибровки

(для газовой хроматографии с капиллярной колонкой

и с делением потока)

(для газовой хроматографии с капиллярной колонкой и с делением

потока)

На хроматограмме раствора сравнения (а) измеряют приведенное время удерживания (t′

)

каждого пика. Приведенное время удерживания t′

представляет собой разность между

временем удерживания пика растворителя и временем удерживания пика испытуемого

образца.

Строят график линейной зависимости.

lg(t′

) = f

где:

f – эквивалент числа атомов углерода в цепи.

Идентификацию пиков на хроматограмме испытуемого раствора проводят по прямой

линии и приведенным временам удерживания. Значения эквивалентных длин приведены в

таблице 2.4.22.-4.

Таблица 2.4.22-4. – Значения эквивалентных длин цепи

Количественное определение. Как правило, используют метод внутренней

нормализации; при этом сумму площадей всех пиков на хроматограмме, кроме пиков,

относящихся к растворителю, принимают за 100 %. Содержание каждого компонента

вычисляют как отношение площади соответствующего пика к сумме площадей всех

пиков. Пики, площадь которых составляет менее 0.05 % от суммы площадей всех пиков,

не учитывают.

В определенных случаях, например, при наличии жирных кислот с 12 или менее атомами

углерода, в частной монографии должен быть указан поправочный коэффициент для

преобразования площадей пиков в проценты (м/м).

Испытуемый раствор. 0.100 г испытуемого образца помещают в центрифужную

пробирку с завинчивающейся крышкой вместимостью 10 мл, прибавляют 1 мл гептана P

и 1 мл диметилкарбоната P и энергично перемешивают при умеренном нагревании при

температуре от 50 °C до 60 °C. К неостывшему раствору прибавляют 1 мл раствора 12 г/л

натрия P в метаноле безводном P, приготовленного с необходимыми

предосторожностями, и энергично перемешивают в течение 5 мин. Добавляют 3 мл воды

дистиллированной Р и энергично перемешивают в течение 30 с. Смесь центрифугируют в

течение 15 мин со скоростью 1500 об/мин. Хроматографируют 1 мкл органического слоя.

Растворы сравнения и оценка хроматограмм. При отсутствии других указаний в частной

– газ-носитель: гелий для хроматографии P;

– скорость газа-носителя: 0.9 мл/мин;

– деление потока: 1:100;

– режим изменения температуры:

– детектор: пламенно-ионизационный;

– объем вводимой пробы: 1 мкл.

МЕТОД С

Метод неприменим для масел, содержащих глицериды жирных кислот с эпокси-,

гидроэпокси-, гидроперокси-, альдегидными, кетоновыми, циклопропиловыми и

циклопропениловыми группами и сопряженными полиненасыщенными и ацетиленовыми

компонентами из-за частичного или полного разрушения данных групп.

Испытуемый раствор. 0.10 г испытуемого образца (масла) помещают в коническую

колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 2 мл раствора 20 г/л натрия гидроксида P в

метаноле P и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. Затем через

натрия сульфатом безводным Р.

Растворы сравнения и оценка хроматограмм. При отсутствии других указаний в частной

монографии следуют указаниям, приведенным в методе А.